Kit de reactivos en solución 2-D Quant

colorantede electroforesisde concentración de proteínas

2-D Quant Kit está diseñado para la determinación precisa de la concentración de proteínas en muestras preparadas para técnicas de electroforesis como la electroforesis 2-D, SDS-PAGE o IEF. Determina con precisión la concentración de proteínas en presencia de 2% de SDS, 1% de DTT, 8 M de urea, 2 M de tiourea, 4% de CHAPS, 2% de Pharmalyte y 2% de tampón IPG. Precipita cuantitativamente las proteínas dejando atrás las sustancias interferentes. Respuesta lineal en el rango de 0 a 50 μg de proteína, con volúmenes de muestra recomendados de 1 a 50 μl. Los métodos espectrofotométricos habituales de cuantificación de proteínas se basan en la unión del colorante Coomassie o en la reducción catalizada por proteínas del ion cúprico (Cu2+) a ion cuproso (Cu+). Los ensayos de fijación de colorantes no pueden utilizarse en presencia de ningún reactivo que también fije el colorante. Esto incluye anfolitos portadores y detergentes como PlusOne CHAPS, SDS y Triton X-100. Los ensayos que dependen de la reducción del ion cúprico no pueden utilizarse en presencia de reductores como DTT, o en presencia de reactivos que formen complejos con el ion cúprico, como tiourea o EDTA. El procedimiento del kit 2-D Quant funciona precipitando cuantitativamente las proteínas y dejando atrás las sustancias interferentes. El ensayo se basa en la unión específica de iones cúpricos a proteínas. Las proteínas precipitadas se resuspenden en una solución que contiene cobre y el cobre no unido se mide con un agente colorimétrico. La absorbancia a 480 nm está inversamente relacionada con la concentración de proteínas.