detección cualitativa del ARN del virus 2019 en muestras del tracto respiratorio superior
(extractos nasofaríngeos y orofaríngeos) mediante sistemas de PCR en tiempo real. Se considera una ayuda en el diagnóstico de la infección por el virus 2019.
2. Principio de la RT-PCR en tiempo real
El principio de la detección en tiempo real se basa en el ensayo fluorogénico de la 5'nucleasa. Durante la reacción de PCR, la ADN polimerasa
escinde la sonda en el extremo 5' y separa el colorante reportero del colorante quencher sólo cuando la sonda se hibrida con el ADN diana.
Esta escisión da lugar a la señal fluorescente generada por el colorante informador escindido, que es monitorizada en tiempo real por el sistema de detección de la PCR. El ciclo de PCR en el que se detecta inicialmente un aumento de la señal de fluorescencia (Ct) es proporcional a la cantidad del producto de PCR específico. La monitorización de las intensidades de fluorescencia en tiempo real permite detectar el producto acumulado sin tener que volver a abrir el tubo de reacción tras la amplificación.
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