La VENUS-fusion Library de S. cerevisiae consiste en cepas que expresan dos fragmentos (VN o VC) de la proteína fluorescente VENUS unidos al C-terminal de cada proteína. La interacción de dos proteínas puede analizarse fácil y rápidamente para todas las proteínas de levadura, y la interacción entre proteínas expresadas en estado natural puede analizarse utilizando su propio promotor en la célula.
Características y ventajas
Análisis de interacciones proteicas y localización intracelular en células vivas
Observación sencilla posible sólo con un microscopio de fluorescencia
Facilidad para estudiar la función y la interacción de nuevas proteínas desconocidas
Posibilidad de análisis de proteinilación (ubiquitinación, sumoilación, neddilación, etc.)
Visión general
La biblioteca de fusión VENUS de S. cerevisiae se desarrolló en la Universidad Nacional de Seúl (VN-fusion Library: Genome Res. 2013. 23:736-746 & VC-fusion Library: Genome Res. 2019. 29:135-145). Bioneer posee su licencia comercial exclusiva. La biblioteca de fusión VENUS consiste en cepas de S. cerevisiae que expresan un ORF que contiene cada fragmento de VENUS (VN & VC) en el C-terminal. La proteína de fusión VN/VC se insertó en el cromosoma de la levadura mediante recombinación homóloga y se expresó utilizando su propio promotor. La biblioteca VN consta de 5.809 cepas y la biblioteca VC consta de 5.552 cepas, que cubren más del 90% del proteoma de S. cerevisiae. .
Principio
Ensayo de complementación por fluorescencia bimolecular (BiFC)
En la técnica de complementación de fluorescencia bimolecular (BiFC), una proteína fluorescente (VENUS) se divide en fragmentos N-terminal (VN) y C-terminal (VC) y, a continuación, se une a cada una de las dos proteínas con las que se desea interactuar y expresar.
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