La densidad de las células mononucleares (linfocitos y monocitos) en la sangre periférica oscila entre 1,075 y 1,090 g/ml, que es diferente de la de los glóbulos rojos, los leucocitos multinucleares y las plaquetas.por lo tanto, el Medio de Separación de Linfocitos Humanos se utiliza para generar un cierto grado de gradiente de densidad, y la sangre entera diluida se pavimenta suavemente sobre el medio de separación. Después de la centrifugación, los glóbulos rojos y los granulocitos se hunden en el fondo del tubo debido a su gran densidad; como sus densidades son inferiores o iguales a la densidad del medio de separación, los linfocitos y los monocitos se encuentran en la superficie del medio de separación. También puede haber una pequeña cantidad de células suspendidas en el medio de separación. Aspirando las células de la superficie del medio de separación, se pueden separar las células mononucleares de la sangre periférica.
Esta serie de productos presenta una serie de ventajas, como un uso rápido y sencillo, ausencia de citotoxicidad, alto rendimiento celular y buena vitalidad.
Solución de problemas
La temperatura óptima de separación es (20±5)℃, más allá de la cual el efecto de separación se verá afectado. Precalentar el medio de separación a temperatura ambiente (20±5℃) y agitar suavemente antes de usar. Evite utilizar el medio de separación directamente del refrigerador.
Para el medio de separación, el medio isotónico (PBS o NaCl al 0,9%) utilizado para diluir la sangre anticoagulada debe ser estéril, y puede sustituirse por el medio RPMI-1640.
la dilución 1:1 de la sangre puede reducir la coagulación de los eritrocitos y aumentar la cantidad de linfocitos cosechados.
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