Este kit ELISA utiliza el principio ELISA Competitivo. La microplaca ELISA proporcionada en este kit ha sido pre-recubierta con SPH. Los estándares o las muestras se añaden a los pocillos apropiados de la placa micro ELISA y luego con un anticuerpo conjugado con biotina específico para SPH. A continuación, se añade avidina conjugada con peroxidasa de rábano picante (HRP) a cada pocillo de la microplaca y se incuba. Después se añade la solución de sustrato TMB. La reacción enzima-sustrato se termina añadiendo solución de ácido sulfúrico y el cambio de color se mide espectrofotométricamente a una longitud de onda de 450 nm ± 10 nm. La concentración de SPH en las muestras se determina entonces comparando la DO de las muestras con la curva estándar.
Datos técnicos
Dado que los valores de DO de la curva estándar pueden variar en función de las condiciones de realización real del ensayo (por ejemplo, operador, técnica de pipeteado, técnica de lavado o efectos de la temperatura), el operador debe establecer una curva estándar para cada ensayo. La curva estándar típica y los datos se proporcionan a continuación sólo como referencia.
Precisión
Precisión intraensayo (precisión dentro de un ensayo): 3 muestras con nivel bajo, medio y alto se analizaron 20 veces en una placa, respectivamente.
Precisión entre ensayos (precisión entre ensayos): se analizaron 3 muestras con nivel bajo, medio y alto en 3 placas diferentes, 20 repeticiones en cada placa, respectivamente.
Tasa de recuperación
Se evaluó en varias matrices la recuperación de muestras con tres niveles diferentes de spiked en todo el rango del ensayo.
Lineal
Las muestras se enriquecieron con altas concentraciones de proteínas diana y se diluyeron con estándar de referencia y diluyente de muestra para producir muestras con valores dentro del intervalo del ensayo.
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