Ni Focurose FF (TED) es un método de purificación que utiliza la interacción entre Ni2+ y ciertos aminoácidos (principalmente histidina, cisteína y triptófano) en las cadenas laterales de las proteínas para la separación y purificación. Es adecuado para la purificación de proteínas marcadas con His y otras biomoléculas que interactúan con Ni2+. La fuerte propiedad quelante del Ni2+ permite su aplicación directa en la purificación de proteínas marcadas con His expresadas en sistemas de secreción eucarióticos, tolerando mayores niveles de agentes reductores y quelantes sin necesidad de pretratamiento de la muestra. La resina puede limpiarse y regenerarse fácilmente sin necesidad de eliminar el níquel, lo que permite la limpieza directa con NaOH.
Características
Rápida y sencilla (purificación en un solo paso)
Tolera niveles más altos de agentes reductores y quelantes, lo que permite la aplicación directa de proteínas marcadas con His expresadas en sistemas de secreción eucarióticos sin pretratamiento, maximizando la conservación de la actividad proteica.
No necesita decapado de níquel, lo que permite la limpieza directa con NaOH, acortando significativamente el ciclo de limpieza.
Menor lixiviación de níquel en comparación con las tradicionales Ni Focurose FF (IDA) y Ni FocuroseFF (IMAC), eliminando la necesidad de regeneración repetitiva.
Parámetros de rendimiento
Agarosa al 6% altamente reticulada
Gama de tamaños de partículas
45-165µm
Tamaño medio de las partículas (D50)
90±5µm
Capacidad de aglutinación
≥10 mg (proteína marcada con His)/mL (resina)
estabilidad del pH
3-12 (a largo plazo) 2-14 (a corto plazo)
Estabilidad química
0.01M HCl, 0,01M NaOH (una semana)
20mM EDTA, 10mM DTT, 1M NaOH, 8M urea, 6M HCl guanidina (24 horas)
100mM EDTA, 0,5M imidazol (2 horas) 30% isopropanol (20 minutos)
Velocidad de flujo lineal (0,3 MPa)
≥300 cm/h
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