Reactivo ADN polimerasas Titan HotTaq

para la investigaciónpara PCR

La ADN polimerasa Titan HotTaq (Fig. 1) es una ADN polimerasa Titan Taq modificada. A temperatura ambiente es inactiva, sin actividad polimerasa. La Titan HotTaq DNA Polymerase se activa mediante una incubación de 15 minutos a 95-97°C, lo que impide la extensión de cebadores recocidos de forma inespecífica y de cebadores-dímeros formados a bajas temperaturas durante la preparación de la PCR. La enzima tiene actividad exonucleasa de sustitución dependiente de la polimerización de 5' a 3', pero carece de actividad exonucleasa de 3' a 5'. La enzima tiene "actividad extensasa" que permite la clonación TA. Concentración: 5 unidades/µl Definición de unidad: Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para catalizar la incorporación de 10 nmol de dNTP en una forma insoluble en ácido en 30 min a 74°C. Fuente: Purificada a partir de una cepa de E. coli portadora de un plásmido superproductor que contiene un gen modificado de la ADN polimerasa de Thermus aquaticus. Control de calidad: La enzima está libre de actividades de mellado y cebado, exonucleasas y endonucleasas inespecíficas. SDS/PAGE - banda de 95 kD, >98% de pureza. Actividad y estabilidad comprobadas mediante termociclado. La tasa de error por nucleótido por ciclo es de ~ 2,5 x 10-5; la precisión es de ~ 4 x 104. La vida media estimada a 95°C es de 1,5 horas. Almacenamiento y tampón de dilución: 50% glicerol (v/v), 20 mM Tris-HCl pH 8,7 a 25°C, 100 mM KCl, 0,1 mM EDTA y estabilizadores. Se suministra con: 10x Tampón de Reacción 1 (Mg2+, sin detergentes) Tris-HCl y (NH4)2SO4 10x Tampón de Reacción 2 (sin Mg2+) Tris-HCl, (NH4)2SO4 y detergente 25 mM MgCl2 10x Enhancer - Aditivo que facilita la amplificación de plantillas difíciles (por ejemplo, plantillas de ADN ricas en GC).