El inmunoensayo CBIACTH es un lumELISA (ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas por quimioluminiscencia) de dos sitios para la medición de la cadena biológicamente activa de 39 aminoácidos de la ACTH. Un anticuerpo policlonal de cabra contra la ACTH, purificado por cromatografía de afinidad, y un anticuerpo monoclonal de ratón contra la ACTH son específicos para regiones bien definidas de la molécula de ACTH. Un anticuerpo está preparado para unirse sólo al C-terminal de la ACTH 34-39 y este anticuerpo está biotinilado. El otro anticuerpo está preparado para unirse sólo a la región media y N-terminal de ACTH 1-24 y este anticuerpo está marcado con peroxidasa de rábano picante [HRP] para la detección. En este ensayo, los calibradores, controles o muestras se incuban simultáneamente con el anticuerpo marcado con enzima y un anticuerpo acoplado con biotina en un pocillo de microplaca recubierto con estreptavidina. Al final de la incubación del ensayo, se lava el micropocillo para eliminar los componentes no unidos. Tras la adición del sustrato de luminol, la actividad enzimática en la fracción unida a la enzima es directamente proporcional a la concentración de ACTH en la muestra. Se prepara una curva estándar que relaciona la unidad luminosa (RLU) con la concentración de ACTH. Las concentraciones de ACTH presentes en los controles y las muestras se determinan directamente a partir de esta curva.
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