Cubeta de electroforesis para PCR EHS1 series

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El rango de tamaños de fragmentos a separar determinará la elección de la concentración de agarosa para un gel. La concentración típica de agarosa es del 0,5% al 3,0%. Para fragmentos de ADN grandes se requieren geles de bajo porcentaje, mientras que para fragmentos de ADN pequeños se recomiendan geles de alto porcentaje. Los geles débiles (0,5% de agarosa) deben electroforearse a bajas temperaturas (por ejemplo, -4°C). Los geles de agarosa de 0,75% a 1,0%, para electroforesis de rutina, se recomiendan para una amplia gama de separaciones (0,15 a15 kb). los geles de agarosa al 2...4% suelen seleccionarse para la resolución de fragmentos de PCR. Si el gel debe fotografiarse posteriormente, los geles finos (2 a 3 mm) con bajo porcentaje de agarosa son mejores que los geles gruesos o de alto porcentaje. Estos últimos producen una mayor opacidad y autofluorescencia. Tampón de electroforesis El tampón TAE proporciona una resolución óptima de los fragmentos de más de 4 kb de longitud, mientras que para los fragmentos de 0,1 a 3 kb debe seleccionarse el tampón TBE. El tampón TBE tiene mayor capacidad amortiguadora y menor conductividad que el TAE, por lo que debe utilizarse para electroforesis de alto voltaje. Además, el tampón TBE genera menos calor que el TAE a un voltaje equivalente y no permite una deriva significativa del pH. Nota: debido a su menor capacidad tampón, TAE debe circular o mezclarse de vez en cuando para electroforesis de longitud completa, especialmente a voltajes más altos. Influencia de la temperatura La electroforesis a tensiones elevadas produce calor. Además, los tampones de alta conductividad como TAE generan más calor que los tampones de baja conductividad.