Kit de reactivos para amplificación génica Ampli1 WGA PLUS

ADN polimerasaspolimerasa TaqNGS

El Kit Ampli1 WGA PLUS ha sido desarrollado y optimizado para la amplificación equilibrada y completa del contenido total de ADN de una única célula humana. El ADN de entrada (de una sola célula y hasta 1000 células en ~1 μI de PBS) puede proceder de células frescas/vivas y/o fijadas (tubos de PFA2%, CellSave, CellRescue). El kit también puede utilizarse para amplificar hasta 10 ng de ADN genómico (por ejemplo, de muestras de tejido o FFPE). Tras la lisis celular, el ADN se digiere con una enzima de restricción y los adaptadores se ligan a los fragmentos de ADN. Esto garantiza que, para cualquier locus dado del genoma, los alelos correspondientes se amplifiquen como fragmentos genómicos con la misma longitud y un contenido de GC casi idéntico, reduciendo así drásticamente la pérdida alélica debida a la diferente eficiencia de amplificación de las moléculas de ADN originales. La amplificación, realizada en el mismo tubo, está mediada por un único cebador de PCR universal altamente específico para todos los fragmentos y utiliza una ADN polimerasa con actividad de corrección de exonucleasas 3'→5', con una fidelidad 6,5 veces mayor que la ADN polimerasa Taq estándar. El resultado del protocolo Ampli1 WGA es una biblioteca bien equilibrada de fragmentos de aproximadamente 0,2-2 kb que representan todo el genoma. Muchos tipos diferentes de procedimientos de análisis posteriores son compatibles con el producto Ampli1 WGA PLUS, tales como la detección de variantes por Sanger o secuenciación de próxima generación (NGS), microsatélites u otros análisis de genotipado basados en PCR, metaphase CGH, array CGH y análisis de número de copias de todo el genoma por NGS. Dos kits dedicados para análisis posteriores, Ampli1 OncoSeek Panel y Ampli1 LowPass Kit para Illumina,