Se mide por su capacidad de hidrolizar el grupo 5'-fosfato del sustrato adenosina-5'-monofosfato (AMP). El producto ortofosfato se mide mediante un kit de detección de fosfato verde de malaquita . La actividad específica es >12.500 pmol/min/μg, medida en las condiciones descritas.
Secuencia N-terminal
Análisis - Trp27
Masa molecular prevista - 85 kDa
SDS-PAGE - 84-93 kDa en condiciones reductoras.
Sin portador
¿Qué significa CF?
CF significa Carrier Free (libre de portador). Normalmente añadimos albúmina de suero bovino (BSA) como proteína portadora a nuestras proteínas recombinantes. La adición de una proteína portadora mejora la estabilidad de la proteína, aumenta su vida útil y permite almacenar la proteína recombinante a una concentración más diluida. La versión sin portador no contiene BSA.
¿Qué formulación es la adecuada para mí?
En general, aconsejamos adquirir la proteína recombinante con BSA para su uso en cultivos celulares o tisulares, o como estándar ELISA. Por el contrario, la proteína sin portador se recomienda para aplicaciones en las que la presencia de BSA podría interferir.
Procedimiento de ensayo
Materiales
Tampón de ensayo: 25 mM Tris, 5 mM MgCl2, pH 7,5
Quimera 5'-Nucleotidasa/CD73 Fc humana recombinante (rhCD73/mFc)
Sustrato: Monofosfato de adenosina (AMP), 5 mM stock en agua desionizada
Kit de detección de fosfato verde de malaquita
placa transparente de 96 pocillos
Lector de placas con capacidad de lectura de absorbancia
Prepare una curva estándar a partir del estándar de fosfato 1 M añadiendo 10 µl del estándar de fosfato 1 M a 990 µl de tampón de ensayo para obtener una reserva de 10 mM. Continúe añadiendo 10 µL del stock de Fosfato 10 mM a 990 µL de Tampón de Ensayo para un stock de 100 µM (esta es la primera dilución para usar como estándar).
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