IgA humana. Los estándares o las muestras se añaden a los pocillos de la microplaca ELISA y se combinan con el anticuerpo específico. A continuación, se añaden sucesivamente a cada pocillo de la microplaca un anticuerpo de detección biotinilado específico para IgA humana y un conjugado de avidina y peroxidasa de rábano picante (HRP) y se incuban. Los componentes libres se lavan. Se añade la solución de sustrato a cada pocillo. Sólo los pocillos que contienen IgA humana, anticuerpo de detección biotinilado y conjugado Avidina-HRP aparecerán de color azul. La reacción enzima-sustrato se termina añadiendo solución de parada y el color se vuelve amarillo. La densidad óptica (DO) se mide espectrofotométricamente a una longitud de onda de 450 nm ± 2 nm. El valor de DO es proporcional a la concentración de IgA humana. Se puede calcular la concentración de IgA Humana en las muestras comparando la DO de las muestras con la curva estándar.
Datos técnicos
Dado que los valores de DO de la curva estándar pueden variar en función de las condiciones de realización real del ensayo (por ejemplo, operador, técnica de pipeteo, técnica de lavado o efectos de la temperatura), el operador debe establecer una curva estándar para cada ensayo. La curva estándar típica y los datos se proporcionan a continuación sólo como referencia.
Precisión
Precisión intraensayo (precisión dentro de un ensayo): 3 muestras con nivel bajo, medio y alto se analizaron 20 veces en una placa, respectivamente.
Precisión entre ensayos (precisión entre ensayos): se analizaron 3 muestras con nivel bajo, medio y alto en 3 placas diferentes, 20 repeticiones en cada placa, respectivamente.
Tasa de recuperación
Se evaluó en varias matrices la recuperación de muestras con tres niveles diferentes de spiked en todo el rango del ensayo.
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