SMARTer Target RNA Capture para Illumina es un sistema completo diseñado para generar ADNc a partir de ARN total enriquecido. La RNA-seq dirigida puede superar varios retos inherentes a los experimentos de RNA-seq de amplificación del transcriptoma completo (WTA), mejorando la cobertura de la secuencia y la sensibilidad de la detección de transcritos de interés que pueden estar presentes en cantidades bajas. Los enfoques de RNA-seq dirigidos también tienen la ventaja de ahorrar costes y simplificar el análisis. El enriquecimiento de los transcritos de interés antes de la síntesis del ADNc permite obtener información sobre transcritos que, de otro modo, podrían pasar desapercibidos o requerir un número mucho mayor de lecturas de secuenciación para ser detectados, como fusiones de genes quiméricos, isoformas de transcritos y variantes de empalme. Al mejorar la sensibilidad, también mejora la potencia del análisis, como se observa en la reducción de la relación señal-ruido.
En el flujo de trabajo SMARTer Target RNA Capture for Illumina, el ARN total se hibrida con sondas de ADN biotiniladas diseñadas por el usuario en menos de cuatro horas y, a continuación, se purifica antes de la captura en Capture Beads, partículas magnéticas recubiertas con estreptavidina. Las Capture Beads se han seleccionado porque presentan una adsorción especialmente baja de proteínas y ácidos nucleicos, y no interfieren con reacciones posteriores como la PCR o la transcripción inversa, lo que permite realizar la síntesis de ADNc en las muestras objetivo mientras permanecen adheridas a las perlas. Las perlas de captura se suministran como parte del kit SMARTer Target RNA Capture for Illumina, y también se venden por separado .
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