Ponceaus S Staining Solution es una tinción de membrana lista para usar para evaluar la eficacia de transferencia de un western blot. Esta tinción se recomienda para la tinción rápida y reversible de proteínas en membranas de nitrocelulosa o PVDF. La tinción con Ponceau S es reversible y puede eliminarse con una breve incubación en NaOH al 0,1%.
La solución de Ponceau S puede utilizarse para evaluar la cantidad total de proteínas o la eficacia de transferencia en membranas de nitrocelulosa y PVDF. La membrana de PVDF se tiñe con Ponceau S durante 5 minutos y se lava con ddH2O durante 3 minutos. Proporciona bandas rosas visibles.
Carril 1, 13: Escala de proteínas preteñida #PM019-0500
Carriles 2-7: Diluciones 2X de la escalera de proteínas sin teñir #PMU12-0500
Carriles 8-12: 2000, 1000, 500, 100, 50 ng de BSA
Materiales necesarios pero no suministrados
Recipiente: caja para la tinción del gel
Agitador: orbital o basculante
Preparación de la reacción
Una vez transferido el gel SDS-PAGE a una membrana de nitrocelulosa o PVDF, coloque la membrana transferida en un recipiente para tinción.
Sumergir la membrana en una cantidad adecuada de solución de tinción de proteínas Ponceau S que sea suficiente para cubrir toda la membrana. Agitar ligeramente el recipiente de tinción durante 5 a 15 minutos a temperatura ambiente. Las bandas de proteínas se teñirán y empezarán a ser visibles en 5 a 15 minutos.
Lavar el exceso de tinte en la membrana con agua desionizada hasta que las bandas de proteínas queden claras.
Para el siguiente paso de bloqueo de la membrana, retire la solución de tinción Ponceau de la membrana colocando la membrana en 20 ml de NaOH al 0,1% durante 1 a 2 minutos y luego enjuague en agua desionizada durante 1 a 2 minutos.
---