Kit de reactivos retrotranscriptasa RScript™

colorantepara síntesis de ADNc

Este kit se ha desarrollado sobre la base de la transcriptasa inversa RScript II, que utiliza un cebador de transcripción inversa con una estructura de bucle de tallo que se une al extremo 3' de la molécula de miARN. Bajo la acción de la transcriptasa inversa RScript II, se obtiene el ADNc de primera cadena de miARN alargado artificialmente. La secuencia general de bucle madre recomendada es 5'-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGAC-3'; también pueden seleccionarse otras secuencias de bucle madre según las necesidades experimentales. Normalmente, los cebadores de transcripción inversa sólo necesitan añadir 6 bases inversas y complementarias en el extremo 3' del miARN a la secuencia stem-loop. Este método es altamente específico y sólo realiza la transcripción inversa en los miARNs maduros sin ser interferido por sus precursores. Los miARNs con secuencias altamente homólogas pueden distinguirse con precisión. Los productos de la transcripción inversa obtenidos con este producto pueden utilizarse directamente para la posterior detección cuantitativa mediante métodos de colorante o sonda. Prueba de sensibilidad de RK004-0050 RK004-0050 se probó con diferentes concentraciones (1000 ng, 100 ng, 10 ng, 1 ng, 0,1 ng, 0,01 ng) de ARN de células Hela como plantillas, dirigidas al gen has-mir16-5p. Las curvas de amplificación demostraron una sensibilidad tan baja como 10 pg de ARN total Rendimiento de la amplificación de RK004-0050 en plantillas de diferentes fuentes (A) ARN de células Hela (B) ARN de ratón RK004-0050 se utilizó con diferentes concentraciones (1000 ng, 100 ng, 10 ng, 1 ng, 0,1 ng) de ARN de células Hela y ARN de ratón como plantillas. Las curvas de amplificación de varios miARN mostraron un rendimiento excelente para Human-U6, has-mir16-5p, has-mir221-3p, Mouse-U6, mmu-mir-5p, mmu-mir24-3p, entre otros.