Reactivo anticuerpos TurboGFP-Trap

de imágenes celularesde bioquímicade proteínas

Las proteínas fluorescentes de fusión son herramientas populares para estudiar la localización de proteínas y la dinámica celular. Estas construcciones suelen fusionar la totalidad -o al menos un dominio funcional- de una proteína diana con uno de los muchos tipos de proteínas fluorescentes informadoras. La proteína verde fluorescente dimérica TurboGFP deriva de la proteína verde fluorescente CopGFP del copépodo Pontellina plumata (Shagin et al., 2004). Posee una fluorescencia verde brillante con un máximo de excitación a 482 nm y un máximo de emisión a 502 nm. La TurboGFP es una proteína de maduración rápida: su señal fluorescente dentro de una célula es visible antes que la de otras proteínas fluorescentes verdes. La TurboGFP sólo comparte aproximadamente un 20 % de identidad de secuencia con las variantes de la GFP de las medusas. Por lo tanto, la mayoría de los anticuerpos anti-GFP no se unen a TurboGFP - incluyendo nuestro GFP-Nanobody utilizado en GFP-Trap. Es fácil obtener imágenes de células utilizando un constructo de proteína de fusión TurboGFP, aunque para obtener una imagen completa estos datos de imagen se combinan a menudo con información bioquímica adicional de la proteína (o dominio proteico) de interés. Para estos experimentos bioquímicos, normalmente se diseña una segunda proteína de fusión utilizando un dominio "tag" diferente que permita la purificación. Estos análisis in vitro adicionales pueden utilizarse para confirmar la funcionalidad de la construcción de fusión "marcada", así como para extraer complejos multiproteicos que puedan formarse en el medio celular. La falta de reactivos específicos, fiables y eficaces ha limitado el uso de la GFP y las proteínas de fusión fluorescentes relacionadas, tanto en estudios de biología celular como en análisis bioquímicos directos.