Le allana el camino hacia el análisis funcional de una pregunta de investigación específica.
Uso previsto
Este kit FluoroSpot Path está indicado para el recuento de células B que secretan IgG humana en respuesta al SARS-CoV-2 (Spike y RBD) utilizando el ensayo FluoroSpot. También se pueden enumerar los linfocitos B que secretan IgG independientemente de la especificidad del antígeno (IgG total). Sólo para uso en investigación. No para uso en procedimientos de diagnóstico.
Para células B con memoria, recomendamos la preestimulación con R848 e IL-2 humana recombinante (ambos incluidos).
Rendimiento
Se incubaron PBMC humanas de un individuo convaleciente de COVID-19 con R848+IL-2 (estimula las células B de memoria) en tubos durante tres días. A continuación, las células se lavaron abundantemente y se añadieron a una placa FluoroSpot (250.000 células/pocillo) recubierta con mAbs IgG antihumanos. Las manchas IgG específicas de Spike se detectaron con Spike-GAL, es decir, proteína Spike recombinante con una etiqueta de péptido GAL, seguida de anti-GAL-490. Las manchas específicas de RBD se detectaron con anti-GAL-490. Las manchas específicas de RBD se detectaron con RBD-WASP, es decir, la proteína recombinante Receptor Binding Domain con una etiqueta peptídica WASP, seguida de anti-WASP-640. Las manchas se analizaron con Mabtech-GAL. Las manchas se analizaron con Mabtech IRIS.
Descripción del analito -
La inmunoglobulina G (IgG) es el isotipo de Ig más abundante en el suero, constituyendo aproximadamente el 80% de todas las inmunoglobulinas séricas. En humanos, existen cuatro subclases de inmunoglobulina G, con las mayores concentraciones séricas de IgG1 seguida de IgG2, IgG3 e IgG4. En ratones, las subclases de IgG se definen como IgG1, IgG2a/c, IgG2b e IgG3. La molécula de IgG consta de dos cadenas pesadas y dos ligeras (κ o λ), lo que da lugar a una molécula con dos brazos para la unión al antígeno.
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