El kit de detección de IFN-β humano HTRF es un inmunoensayo diseñado para la detección y cuantificación de IFN-β humano en sobrenadantes celulares, en un formato homogéneo (sin pasos de lavado, sin pasos de separación).
Resumen
Los interferones de tipo I, interferón alfa (IFN-α) e interferón beta (IFN-β), desempeñan papeles esenciales en la respuesta inmunitaria innata a las infecciones víricas. El IFN-β es producido por fibroblastos, macrófagos y células dendríticas, así como por células endolíticas. La expresión del gen IFN-β está controlada por factores de transcripción como IRF-3, c-Jun/ATF-2 y NF-kappaB corriente abajo de los receptores de reconocimiento de patrones, como los receptores tipo Toll. En particular, el IFN-β es el principal indicador funcional de la activación de la vía cGas-cGAMP-STING. Una vez secretado, el IFN-β se une y activa el complejo de receptores IFNAR1/IFNAR2, que depende de los factores de transcripción STAT1/2. La fosforilación de STAT1/2 se produce en el IFN-β. La fosforilación de STAT1/2 conduce a la inducción de la expresión de genes antivirales.
La evaluación de muestras de suero a menudo requiere una mayor sensibilidad. En algunos casos, los ensayos AlphaLISA pueden tener sensibilidad suficiente para permitir la detección de niveles bajos de analitos en suero o plasma.
Principio del ensayo
El sobrenadante celular, la muestra o el estándar se dispensan directamente en la placa de ensayo para la detección mediante reactivos HTRF® (placa blanca de 384 pocillos de bajo volumen o placa Revvity de 96 pocillos de bajo volumen en 20 µl). Los anticuerpos marcados con el donante y el aceptor HTRF se mezclan previamente y se añaden en un único paso de dispensación, para agilizar aún más el procedimiento del ensayo. El ensayo puede realizarse en un formato de hasta 1536 pocillos simplemente redimensionando proporcionalmente cada volumen de adición.
Análisis de los datos del ensayo
La curva logística de 4 parámetros (4PL) se recomienda habitualmente para ajustar una curva estándar ELISA.
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