El CellAmp Whole Transcriptome Amplification Kit (Real Time), Ver. 2 permite pasar de células a ADNc listo para su análisis mediante PCR en tiempo real. Cuando se utilizan técnicas convencionales para trabajar con trazas de ácidos nucleicos, la pérdida de producto durante los pasos de purificación es un problema frecuente. Sin embargo, este kit de células a ADNc garantiza un buen rendimiento del producto, ya que no se requieren los pasos de purificación del ARN y el ADNc que provocan pérdidas.
El procedimiento comienza con la lisis celular, seguida de una reacción de transcripción inversa con el cebador adaptador dT (RT dT Primer 2) para sintetizar ADNc a partir de ARNm. A continuación, se utiliza la desoxinucleotidil transferasa terminal (TdT) para añadir una cola dA al ADNc sintetizado. La cola 3' dA resultante, que contiene el producto de ADNc, se utiliza como molde directo para la PCR, lo que reduce el número de ciclos de amplificación necesarios.
Además de pasar de células a ADNc, este producto puede utilizarse para amplificar ADNc a partir de cantidades traza de ARN.
El CellAmp Whole Transcriptome Amplification Kit (Real Time), Ver. 2 utiliza un paso adicional de tratamiento con exonucleasa I, que ayuda a suprimir la amplificación inespecífica derivada del cebador y aumenta el rendimiento de los genes de baja expresión
El CellAmp Whole Transcriptome Amplification Kit (Real Time) Ver. 2 permite la amplificación directa de ADNc a partir de un pequeño número de células. El ADNc amplificado puede utilizarse como molde para la PCR en tiempo real. Cuando se utilizan técnicas convencionales para trabajar con cantidades traza de ácidos nucleicos, la pérdida de ácido nucleico durante los pasos de purificación es un problema frecuente. Sin embargo, este kit proporciona un buen rendimiento porque no se requieren pasos de purificación que induzcan pérdidas para el ARN y el ADNc.
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