Kit de prueba para la investigación LS-K268

proteína totalde ATPde adenosín monofosfato

La proteína quinasa activada por 5-AMP (AMPK) es un sensor clave del equilibrio energético intracelular. La AMPK se activa en respuesta a un aumento de la relación AMP/ATP que puede deberse a diversos factores, como la contracción muscular, la inanición o la hipoxia. La AMPK es un complejo proteico heterotrimérico formado por subunidades Alfa (63 kDa), Beta (38 kDa) y Gamma (38 kDa). Para cada subunidad se han identificado isoformas (alfa-1, alfa-2, beta-1, beta-2, gamma-1, gamma-2, gamma-3) que teóricamente permiten la formación de 12 proteínas diferentes. La subunidad alfa contiene un dominio serina/treonina quinasa y las subunidades reguladoras contienen sitios de unión para AMP y ATP y para glucógeno. La AMPK se activa por fosforilación en Thr-172 dentro del dominio catalítico. La unión de AMP resulta en un aumento de 2 a 5 veces en la actividad AMPK en comparación con el nivel basal. La unión del AMP a la subunidad alfa provoca la activación alostérica de la quinasa e induce un cambio conformacional en el dominio quinasa que protege a la AMPK de la desfosforilación de Thr-172. Este ELISA celular mide la AMPK fosforilada en células enteras y normaliza la señal al contenido total de proteína. El anticuerpo reconoce ambas subunidades alfa y, por tanto, puede utilizarse en células de todos los tejidos (humano, ratón, rata). Este ensayo sencillo y eficaz elimina la necesidad de preparar lisados celulares y puede utilizarse para estudiar la regulación de la AMPK en ensayos a corto y largo plazo. En este ensayo, las células cultivadas en placas de 96 pocillos se fijan y permeabilizan en los pocillos. La fosforilación de AMPK (pAMPK) se mide utilizando un ELISA fluorescente seguido de la medición de la proteína total en cada pocillo.