Este kit ELISA utiliza el principio Sandwich-ELISA. La microplaca ELISA provista en este kit ha sido pre-recubierta con un anticuerpo específico para TNF-α de Rata. Los estándares o muestras se añaden a los pocillos de la microplaca ELISA y se combinan con el anticuerpo específico. A continuación, se añaden sucesivamente a cada pocillo de la microplaca un anticuerpo de detección biotinilado específico del TNF-α de rata y un conjugado de avidina y peroxidasa de rábano picante (HRP) y se incuban. Los componentes libres se lavan. Se añade la solución de sustrato a cada pocillo. Sólo los pocillos que contienen TNF-α de rata, anticuerpo de detección biotinilado y conjugado Avidina-HRP aparecerán de color azul. La reacción enzima-sustrato se termina con la adición de la solución de parada y el color se vuelve amarillo. La densidad óptica (DO) se mide espectrofotométricamente a una longitud de onda de 450 nm ± 2 nm. El valor de DO es proporcional a la concentración de TNF-α de Rata. Se puede calcular la concentración de TNF-α de Rata en las muestras comparando la DO de las muestras con la curva estándar.
Datos técnicos
Como los valores de DO de la curva estándar pueden variar de acuerdo con las condiciones de la realización real del ensayo (por ejemplo, operador, técnica de pipeteo, técnica de lavado o efectos de la temperatura), el operador debe establecer una curva estándar para cada ensayo. La curva estándar típica y los datos se proporcionan a continuación sólo como referencia.
Precisión
Precisión intraensayo (precisión dentro de un ensayo): 3 muestras con nivel bajo, medio y alto se analizaron 20 veces en una placa, respectivamente.
Precisión entre ensayos (precisión entre ensayos): se analizaron 3 muestras con nivel bajo, medio y alto en 3 placas diferentes, 20 repeticiones en cada placa, respectivamente.
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