Este kit se basa en el método Ziehl-Neelsen recomendado por la OMS y es una tinción química destinada a la detección de bacterias ácido-alcohol resistentes como Mycobacterium tuberculosis.
Principio:
Las bacterias acidorresistentes, como Mycobacterium tuberculosis y Mycobacterium leprae, son difíciles de teñir debido a la cápsula lipoide de su pared celular. Sin embargo, una vez que la cápsula lipoide se tiñe con un colorante reforzado como la carbolfucsina, el compuesto recién formado resistirá la decoloración del ácido-alcohol y conservará el color original teñido (rojo), con lo que podrá diferenciarse fácilmente de otros microorganismos que aún adsorben la tinción azul contraria. El fenol es mordiente y es capaz de mejorar la capacidad de tinción.
Métodos:
1. Desparafinar el tejido, añadir Carbolfuchsin, calentar con llama pequeña y mantener la tinción vaporizando durante 5~10 minutos. Evitar vaporizar hasta secar o hervir.
2. Después de enfriar, aclarar con agua suavemente. Secar el portaobjetos suavemente con papel absorbente.
3. Decolorar durante 1~2 minutos con alcohol ácido.
4. Aclarar con agua suavemente (si el rojo sigue siendo visible en la superficie de la muestra, añadir alcohol ácido de nuevo hasta que el rojo esté completamente decolorado. A continuación, seguir aclarando con agua).
5. Aplicar Azul de Metileno durante 20~30 segundos. Aclarar suavemente con agua.
6. Diferenciar en etanol al 95% durante 5~10 segundos.
7. Deshidratar en etanol absoluto y aclarar con xileno. Montar con medio de montaje.
8. Alternativamente, el paso de deshidratación mostrado arriba puede sustituirse por secado al aire.
9. Examine el portaobjetos terminado bajo una lente de inmersión en aceite.
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