El kit virellaSARS-CoV-2 mutant real time RT-PCR es un ensayo para la diferenciación simultánea de los nuevos linajes de coronavirus (SARS-CoV-2) B.1.1.7 (Reino Unido, UK), B.1.351 (Sudáfrica, ZA) y P.1 (Brasilia, BRA) a partir de muestras biológicas.
2 Principio de la prueba
El kit virellaSARS-CoV-2 mutant real time RT-PCR contiene cuatro sistemas de cebadores y sondas específicos para la detección de mutaciones de la proteína spike del SARS-CoV-2. Cada mutación está relacionada con un colorante específico. Si una de las mutaciones está presente, el canal específico no mostrará señal o mostrará una señal retardada. Las mutaciones cubiertas con este ensayo son del69/70 (FAM), del 241-243 (ROX), N501Y (HEX) y H655Y (Cy5). En el caso de B.1.1.7 (UK), B.1.351 (ZA) o P.1 (BRA), el canal HEX y un canal adicional, dependiendo de la mutación, no mostrarán señal o mostrarán una señal retardada (Tabla 7). En este caso, los otros dos canales deberían mostrar una señal normal.
4 Equipo y reactivos que debe suministrar el usuario
- Microtubos estériles
- Pipetas (volumen ajustable)
- Puntas de pipeta estériles con filtro
- Centrifugadora de mesa
- Vortexer
- Instrumento de PCR en tiempo real
- Tubos de reacción PCR ópticos con tapa o placa de reacción PCR óptica con lámina óptica
- Opcional: Sistema de manipulación de líquidos para automatización
7 Material de muestra
El material de partida para el kit de RT-PCR en tiempo real de virellaSARS-CoV-2 mutante es ARN calificado como positivo para SARS-CoV-2 mediante RT-PCR en tiempo real. Los eluidos con un número de copias muy bajo que den lugar a valores de CT >32 no son adecuados para el ensayo con la RT-PCR en tiempo real de virellaSARS-CoV-2 mutante.
8 Preparación de la muestra
El ARN eluido debe diluirse 1:10 en tampón de dilución para optimizar las condiciones para la detección de mutaciones.
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