Para la determinación cuantitativa de la alanina aminotransferasa en suero.
METODOLOGÍA
La Federación Internacional de Química Clínica (IFCC) publicó en 1980 una propuesta de método recomendado utilizando el ensayo acoplado LDH-NADH. El procedimiento aquí descrito se basa en dicho método.
Principio
La ALT cataliza la transferencia del grupo amino de la L-alanina a -cetoglutarato, dando lugar a la formación de piruvato y L-glutamato. La lactato deshidrogenasa cataliza la reducción del piruvato y la oxidación simultánea de NADH a NAD. La velocidad de disminución de la absorbancia resultante es directamente proporcional a la actividad de la ALT.
PREPARACIÓN DE REACTIVOS
Prepare el reactivo de trabajo mezclando 4 partes de reactivo R1 con 1 parte de reactivo R2.
(Por ejemplo, 200 µL de R1 con 50 µL de reactivo R2)
DETERIORO DEL REACTIVO
No utilice el reactivo si:
1. La absorbancia inicial a 340 nm es inferior a 0,8.
2. El reactivo no cumple los parámetros de funcionamiento establecidos.
PRECAUCIONES
1. Este juego de reactivos es para uso exclusivo en diagnóstico in vitro.
2. El reactivo R1 contiene azida sódica como conservante. No ingerir.
RECOGIDA Y ALMACENAMIENTO DE MUESTRAS
1. Se recomienda suero no hemolizado. Los glóbulos rojos contienen ALT que puede dar resultados falsamente elevados.
2. La ALT en suero es estable durante tres días a temperatura ambiente (15-30°C), 1 semana a 4°C.
PROCEDIMIENTO
Longitud de onda : 340 nm
Tipo de ensayo: Cinético
Dirección de la reacción : Decreciente
Temperatura : 37°C
Recorrido óptico : 1 cm
1. Llevar a temperatura ambiente ( 15 -30 °C)
2. Poner el fotómetro a 0 (cero ) con agua destilada
3. Mezclar e incubar a 37 °C
4. Después de 60 seg. leer y registrar la absorbancia
5. Volver a poner el tubo a 37 °C.
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