Kit de reactivos para preparación de pruebas KAPA RNA EvoPrep

ADN polimerasasADN ligasapara la investigación

Resumen
Los kits KAPA RNA EvoPrep ofrecen un flujo de trabajo simplificado para la preparación de bibliotecas de ARN para secuenciación de nueva generación (NGS). Basados en la línea KAPA RNA HyperPrep Kit, los EvoPrep convierten el ARN de entrada en bibliotecas ligadas con adaptadores listas para secuenciar, con menos pasos y menor tiempo de manipulación. Producto destinado únicamente para uso en investigación (RUO), no para procedimientos diagnósticos.

KAPA RNA EvoPrep Kit para preparación de bibliotecas ARN

• Flujo rápido de 3,5 horas con tiempo de manipulación mínimo
• Sensible: detecta más transcritos únicos, incluso con entradas bajas y ARN degradado (FFPE)
• Confiable: alta concordancia entre cantidades de entrada y resultados reproducibles

Beneficios clave y aspectos destacados

• Flujo simplificado que reduce el tiempo de manipulación, el uso de reactivos y el material plástico
• Mejores tasas de conversión de bibliotecas y mayores rendimientos en un amplio rango de entradas
• Mayor captación de moléculas únicas (mejor tasa de mapeo único, menor duplicación y menor porcentaje de adaptador-dímero)
• Compatible con automatización: apto para sistemas de manipulación líquida y flujos de trabajo Roche AVENIO Edge
• Incluye química de ligación mejorada (KAPA EvoT4 DNA ligase) y KAPA HiFi HotStart DNA Polymerase en el mix de amplificación para PCR de alta fidelidad y bajo sesgo

Rendimiento y sensibilidad
Los kits muestran rendimiento mejorado en comparación con los KAPA RNA HyperPrep Kits anteriores y varios kits competidores: detectan más genes y transcritos en entradas FFPET de baja calidad y en entradas bajas (5 ng) hasta entradas más altas (hasta los máximos recomendados por el kit). Los datos indican: mayor número de genes detectados en muestras FFPET de baja calidad, mayores tasas de mapeo único, menores tasas de duplicación y menores porcentajes de adaptador-dímero.

Resumen del flujo de trabajo

• Enriquecimiento inicial opcional: captura de mRNA (perlas oligo-dT poly(A)) o depleción de rRNA y/o globina (hibridación con oligos de ADN complementarios seguida de tratamiento con RNase H/DNase)
• Fragmentación de ARN (calor + magnesio)
• Síntesis del primer ADNc por cebado aleatorio
• Síntesis del segundo filamento y A-tailing combinados (dUTP incorporado en el 2º filamento para especificidad de hebra)
• Ligación de adaptadores (ligación TA a fragmentos A-tailed)
• Amplificación de la biblioteca usando una polimerasa de alta fidelidad (la hebra marcada con dUTP no se amplifica para mantener la especificidad de hebra)

Compatibilidad e inputs recomendados
Tabla (variantes de producto e inputs típicos):
Product variant — Typical reactions — EAN
KAPA RNA EvoPrep (24rxn) — 24 reactions — 07613336240564
KAPA RNA EvoPrep (96rxn) — 96 reactions — 07613336240557
KAPA RNA EvoPrep Kit (384rxn) — 384 reactions — 07613336239308
KAPA mRNA EvoPrep (24rxn) — 24 reactions — 07613336239377
KAPA mRNA EvoPrep (96rxn) — 96 reactions — 07613336239384
KAPA RNA EvoPrep+RiboErase HMR (24rxn) — 24 reactions — 07613336239315
KAPA RNA EvoPrep+RiboErase HMR (96rxn) — 96 reactions — 07613336239322
KAPA RNA EvoPrep+RiboErase HMR (384rxn) — 384 reactions — 07613336239339
KAPA RNA EvoPrep+RiboErase Globin (96rxn) — 96 reactions — 07613336239353
KAPA RNA EvoPrep+RiboErase Globin (384rxn) — 384 reactions — 07613336239360

Notas sobre entradas y tipos de muestra: los rangos de entrada recomendados varían según la variante del kit (ejemplos: 0,25 ng–100 ng para ciertos kits RNA EvoPrep, 5 ng–1 µg o 25 ng–1 µg para otros). KAPA mRNA EvoPrep está destinado a ARN de alta calidad (RIN ≥ 7) y workflows de selección poly(A); los kits con RiboErase (HMR) / Globin están destinados a depleción en humano/ratón/ratón y son compatibles con ARN FFPE de baja calidad cuando se usan con las entradas y ajustes de protocolo apropiados.

Almacenamiento y manipulación
Orientaciones típicas de almacenamiento: componentes sensibles a la temperatura (reactivos de síntesis de ADNc y preparación de bibliotecas) deben conservarse a –15°C a –25°C; algunos componentes de enriquecimiento inicial (p. ej., captura mRNA) a 2°C–8°C; KAPA HyperPure Beads a 2°C–8°C. Seguir las Instrucciones de Uso para almacenamiento, manipulación y puntos de parada seguros en el protocolo.

Nota regulatoria / de uso
Solo para uso en investigación. No utilizar en procedimientos de diagnóstico.

Especificaciones

• Familia de productos: KAPA RNA EvoPrep
• Aplicación principal: preparación de bibliotecas ARN para NGS (transcriptoma completo, expresión génica, uniones de splicing, fusiones génicas, lncRNA)
• Opciones de enriquecimiento: sin enriquecimiento (ARN total), captura mRNA (poly(A)), depleción rRNA y/o globina (HMR/Globin)
• Rangos de entrada (ejemplos por kit): 0,25 ng–100 ng; 5 ng–1 µg; 25 ng–1 µg (depende de la variante específica)
• Tiempo de preparación (típico): ~3,5 horas (protocolo optimizado)
• Fragmentación: calor + magnesio, ajustable según la calidad de entrada
• Especificidad de hebra: Sí (incorporación de dUTP en 2º filamento; secuenciación específica de hebra)
• Química de ligación: KAPA EvoT4 DNA ligase
• Polimerasa de amplificación: KAPA HiFi HotStart DNA Polymerase
• Limpieza con perlas: KAPA HyperPure Beads incluidas para pasos de purificación
• Automatización: Compatible con automatización de manejo de líquidos y Roche AVENIO Edge System
• Compatibilidad de especies: KAPA RNA EvoPrep (sin enriquecimiento) — amplio (eucariotas, microbios, plantas, etc.); kits con RiboErase (HMR)/Globin — oligos de depleción para humano, ratón, rata
• Ventajas típicas: sensibilidad mejorada (más transcritos únicos), mayores tasas de mapeo único, menor duplicación y menor adaptador-dímero, menos reactivos/pasos de purificación